IV-) L'HPLC
a) Définition
La chromatographie est une technique de séparation et d'identification d'espèces chimiques basée sur leur différence de solubilité avec l'éluant. Ici, nous nous intéresserons plus particulièrement à la chromatographie liquide à haute performance (HPLC), une technique coûteuse mais plus fiable que les réactions colorées abordées précédemment.
b) Principe
Au départ, le mélange à séparer est injecté à l'entrée de la colonne où il se dilue dans la phase mobile (aussi appelée éluant ou solvant) qui l'entraîne à travers la colonne. Ce liquide passe par un tube appelé colonne. Cette colonne contient généralement du gel de silice, le liquide est alors en phase stationnaire.
Les composés chimique du mélange, ayant une solubilité différente avec la silice, sont plus ou moins retenus: par ce phénomène appelé rétention les composés sont séparés et n'ont plus la même vitesse de traversée de la colonne. Un détecteur ainsi qu'un enregistreur détermine l'ordre et l'« heure » de sortie de chaque espèce. Ainsi un chromatogramme est obtenu. Chaque pic correspond à la présence d'un composé, ayant préalablement effectué des chromatogrammes standards dans les mêmes conditions, il est possible de retrouver la nature chimique de chaque composé du mélange de départ grâce à son pic caractéristique.
L'aire du pic et donc son amplitude peuvent également permettre au calcul de la concentration de l'espèce chimique dans la solution injectée puisqu'elle est proportionnelle à l'aire du pic.
Exemple de chromatogramme
Remarque :
L'éluant est toujours le plus rapide et n'est pas pris en compte dans le chromatogramme puisqu'il n'apporterait aucune information utile. En effet, le gel de silice est un composé polaire c'est pourquoi le solvant doit être apolaire soit organique pour arriver en tête de course !
c) Conclusion
L'HPLC est donc une technique d'analyse à la fois qualitative et quantitative, très utilisée en chimie analytique puisqu'elle permet une étude précise et complète d'une espèce chimique.